北京中检维康生物技术有限公司

                                 （产品编号：IAC322）     

使用对象

IAC-SEP^®叶酸亲和柱能够特异性的纯化样品中的叶酸，它采用了柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与叶酸抗体偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱。它能够特异性的纯化样品中的叶酸。叶酸亲和柱广泛地应用于饮料、牛奶和谷物等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对提高食品的质量和安全性起到十分重要的作用。

原理

叶酸免疫亲和柱能够特异性的纯化样品中的叶酸，将样品与提取液混合、提取、过滤，然后将滤液通过免疫亲和柱。此时，叶酸物质键合在亲和柱中的抗体上。用蒸馏水将免疫亲合柱上的杂质除去。用洗脱液通过分离柱，将叶酸从抗体上分离下来。，将洗脱液注入HPLC或LC-MS进行测定。

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下，不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用。

实验溶液制备

        pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na₂HPO4 12H₂O + 0.24 克 KH₂PO4 + 0.2克KCl  加990mL纯水溶解，加纯水至1升。

     10%抗坏血酸钠：称取10g L-抗坏血酸钠100mL容量瓶中，加水溶解混匀。

      洗脱液（30%乙腈+0.2%三氟乙酸）: 准确量取30mL乙腈加入到100mL容量瓶中，然后再加入0.2mL 三氟乙酸，用纯水定容至100mL。

所需其他试剂：胰酶（sigma P1750）

液相色谱条件

色谱柱： Agilent-C18,4.6×150mm（5um）

流动相：0.1%三氟乙酸：乙腈=85:15（v/v）

流速：0.5 mL/min

检测器：紫外检测器，280nm

进样体积：50uL

将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。将上述样品提取液注入（或分次注入）玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2mL/min（1-2滴/秒）流速缓慢通过免疫亲和柱，直至液面下降到亲和柱管体（未完全流干）。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL洗脱液（30%乙腈+0.2%三氟乙酸）洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集洗脱液于玻璃试管中，然后再加入1.0mL纯水洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脱液于同一玻璃试管中，混匀。供HPLC或LC-MS分析。

注意事项

1)       不要随便更改操作说明书中的操作步骤，如需更改要和本公司技术部联系，确认更改是否合理。

2)       操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，不能太快，否则会使检测结果偏低。

3)    试验中使用的玻璃仪器等，一定要清洗干净，尤其是用次氯酸等处理过的仪器。

需要准备的设备及试剂（中检维康提供）