【实验/设备条件】
（ 1） 色谱条件
仪器： UPLC-MS/MS（ Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱： Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm， 1.9 μm)
流动相： A： 水（ 0.1 %甲酸） B： 甲醇： 乙腈=2:8（ 0.1 %甲酸）
洗脱方式： 梯度洗脱， 见表 1
流速： 0.3 mL/min
柱温： 35℃
进样量： 10 μL
（2） 质谱条件
离子源： HESI
电喷雾电压： 3500 V
鞘气压力： 40 arb
辅气压力： 2 arb
离子传输管： 380 ℃
辅气温度： 350 ℃
【样品提取】
准确称取粉碎均匀的肉类样品 1 g（ 精确至 0.01 g） 于干净离心管中， 加入 8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液， 涡旋混匀后超声提取 20 min， -5℃ 下 120000 r/min 离心 5 min， 取出上清液于另一干净离心管， 试样残渣加入 8 mL 磷酸盐缓冲液， 同上述操作， 合并两次提取液， -5℃ 下 120000 r/min 离心 5 min， 上清液待净化。
Mcllvaine-Na2EDTA 缓冲液： 取柠檬酸·一水 12.9g、 磷酸氢二钠·十二水 10.9g、 乙二胺四乙酸二钠·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氢氧化钠溶液调节 pH 至 5.0± 0.2， 用水稀释至 1000mL。
磷酸盐缓冲液： 取 0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氢二钠溶液稀释至 1000mL。
【实验/操作方法】
二、 样品净化（Clover ®HLB， 200mg/6mL）
活化： 固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。
上样： 取上述待净化液加入活化好的固相萃取柱中。
淋洗： 依次用 5 mL 水， 5 mL 5%甲醇-水溶液， 抽干。
洗脱： 用 8 mL 甲醇： 乙酸乙酯： 氨水=50:50:2 溶液进行洗脱。
收集全部洗脱液， 45℃ 下氮吹至 100 μL 左右， 加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,过 PTFE 亲水滤膜， 上机测试。
三、 基质标准曲线溶液的制备
取 6 个空白基质样品同正常样品一样操作， 收集洗脱液后， 于洗脱液中分别加入适量标液， 再与其他样品洗脱液一同氮吹， 定容， 使终上机溶液的浓度分别为 2 μg/L、 10 μg/L、 50 μg/L、 100 μg/L、 200μg/L、500 μg/L。
【实验结果/结论】
优化 步骤：
1. 在提取过程中降低离心的温度至-5℃可以更好的制样品中的脂肪在水溶液表面的分散， 有利于样品的提取转移。
2. 在超声提取完合并两次的提取液之后， 再进行一次离心， 更好的去除基质的影响， 便于上样过柱。
3. 在淋洗过程中使用 5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液， 可以减少在淋洗过程中部分目标物的损失。
4. 标准中氮吹至 100 μL 左右， 不氮吹干可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。
5. 复溶时， 加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型， 同时提高部分化合物的回收率。
6.为了改善上样后的流速问题， 使用Clover ® HLB (货号 ： HLB2006-M)较普通的 HLB 净化柱可以获得更好的流速。
【仪器/耗材清单】